متطلبات اختبارات مجموعات ELISA

إجراء تباين جيد في الاختبار الشكلي، ويجب أخذ شروط الاختبار للتحكم الإيجابي والسلبي، ويجب عمل العينات المراد اختبارها من نسختين للتأكد من دقة نتائج الاختبار.

في بعض الأحيان تكون الخلفية أعلى، مما يشير إلى تفاعل غير محدد، ويمكن إغلاقه بواسطة مصل الأغنام أو مصل الأرانب أو BSA.

اختيار الظروف التجريبية

في ELISA، من المهم تحديد ظروف تجريبية مختلفة، بما في ذلك: (1) اختيار حاملات الطور - الصلبة: يمكن استخدام العديد من المواد كحاملات الطور الصلبة -، مثل PVC، والبوليسترين، والبولي أكريلاميد والسليلوز. يمكن أن تأخذ شكل لوحة مقعرة، أنبوب اختبار، خرزة، إلخ. في الوقت الحاضر، يتم استخدامها بشكل شائع للحصول على ألواح مقعرة من البوليسترين ذات 40 بئر.

بغض النظر عن نوع الناقل، قبل الاستخدام، يمكن فحصه: باستخدام نفس الكمية من حزمة المستضد، يتم التفاعل في نفس الظروف التجريبية، لمراقبة ما إذا كان رد فعل تجسيد اللون هو التجانس، والذي وفقًا له يكون أداء الامتزاز جيدًا. (2) اختيار الحزمة حسب الجسم المضاد (أو المستضد): الجسم المضاد (أو المستضد) الممتز على سطح حامل الطور - الصلب، تكون شدة المتطلبات أفضل، ويتطلب الامتزاز عمومًا PH بين 9.0 إلى 9.6. درجة حرارة الامتزاز والوقت وكمية البروتين لها أيضًا تأثير معين، بشكل عام أكثر من 4 درجات مئوية من 18 إلى 24 ساعة. يجب معايرة التركيز الأمثل لحزم البروتين: بعد تعبئتها بتركيزات مختلفة من البروتين (0.1، 1.0 و10 ميكروجرام/مل، إلخ)، يتم ملاحظة قيم OD للعينات الإيجابية عندما تكون ظروف الاختبار الأخرى هي نفسها. حدد التركيز مع أكبر قيمة OD وأقل كمية من البروتين.

بالنسبة لمعظم البروتينات، عادة ما يكون من 1 إلى 10 ميكروجرام/مل. (3) اختيار تركيز عمل الجسم المضاد المسمى بالإنزيم -: أولاً، التأثير الأولي للمعايرة باستخدام طريقة ELISA المباشرة (انظر جزء الجسم المضاد المسمى بالإنزيم -).

ثم قم بإصلاح الشروط الأخرى أو استخدم "طريقة المصفوفة المربعة" (حزمة منفعلة، مرجع للعينة المراد فحصها، والأجسام المضادة الموسومة بالإنزيم -هي تخفيفات مختلفة) في النظام التجريبي الرسمي لمعايرة تركيز عملها بدقة. (4) اختيار قاعدة الإنزيم ومانح الهيدروجين: اختيار مانح الهيدروجين غير مكلف، وآمن، وله لون واضح -، وهو في حد ذاته عديم اللون. بعض الجهات المانحة للهيدروجين (مثل OPD، وما إلى ذلك) لها تأثيرات مسرطنة محتملة، ويجب توخي الحذر لحمايتها. يجب على الأشخاص الشرطيين استخدام متبرعين غير -مسببين للسرطان، ذوي حساسية عالية للهيدروجين، مثل TMB وABTS، وهو مانح هيدروجين أكثر إرضاءً حاليًا. بعد فترة من العمل، يجب إضافة الأحماض القوية أو القلويات لوقف التفاعل. عادة ما يكون وقت عمل الركيزة، إلى 10-30 دقيقة مناسبًا. يجب تحضير سائل استخدام الركيزة طازجًا، خاصة إذا تمت إضافة H2O2 قبل الاستخدام.